第281章 变异感染者DNA提取（2/2）

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准备工作如下：

1. 第一次使用时，在Buffer W2 concentrate 和Buffer W1B concentrate 中按试剂瓶上指定的体积加入无水乙醇。

2. Buffer W2（12x96 试剂盒）配制：在提供的500 ml 空瓶中加入15 ml 10xBuffer W2，135 ml 去离子水和350 ml 乙醇，可用100%无水乙醇或95%乙醇。

3. 根据瓶上标签将蛋白酶K 溶解于Buffer PK 中，请勿旋涡振荡。

4. 准备70℃温浴。

5. 使用前检查Buffer BL 是否有沉淀析出，若出现沉淀，请于70℃温浴加热至沉淀完全溶解后再使用。

完成试剂准备工作之后，在钟教授的首肯之下，研究员开始进行DNA的提取。

具体操作步骤如下：

1. 向96 圆孔板的每孔中加入20 ul 蛋白酶K。

2. 加200 ul 抗凝全血到96 圆孔板中。

~undefined 若全血样品体积少于200 ul，用PBS 补充到200 ul。

~undefined 若样品为鸟类血，样品用量须低于10 ul。

~undefined 若需得到RNA-free 的基因组DNA，在步骤3 加入Buffer BL 前加入DNase-free 的RNase A(20 mg/ ml) 。

3. 加200 ul Buffer BL ，注意不要打湿每孔的边缘，用96 圆孔硅胶片密封各孔。

4. 用力混合30 s。

5. 3000 rpm 简短离心使96 圆孔硅胶片上的溶液到96圆孔板内。启动离心机，当速度达到3000rpm后即停止。

6. 在培养箱或烘箱中70℃温浴至少10 min。

7. 3 000 rpm 简短离心使96 圆孔硅胶片上的溶液到96圆孔板内。启动离心机，当速度达到3 000rpm后即停止。

8. 取下96 圆孔硅胶片，每孔加入200 ul 乙醇（96-100%）。

9. 用96 圆孔硅胶片密封各孔，用力混匀混合15 s。3 000 rpm 简短离心使96 圆孔硅胶片上的溶液到圆孔板内。启动离心机，当速度达到3 000 rpm 后即停止。